Молекулярная характеристика и иммунная эффективность фруктозы

Паразиты и переносчики, том 16, Артикульный номер: 169 (2023) Цитировать эту статью

247 Доступов

2 Альтметрика

Подробности о метриках

Клещи являются облигатными гематофагами-эктопаразитами, передающими различные возбудители человеку, диким и домашним животным. Вакцинация – эффективный и экологически чистый метод борьбы с клещами. Фруктозо-1,6-бисфосфатальдолаза (ФБА) — важный фермент гликометаболизма, который является кандидатом в вакцину против паразитов. Однако иммунная защита FBA у клещей неясна.

Открытую рамку считывания (ORF) размером 1092 п.о. FBA из Haemaphysalis longicornis (HlFBA), кодирующую белок из 363 аминокислот, клонировали с использованием методологии ПЦР. Прокариотический вектор экспрессии pET32a(+)-HlFBA был сконструирован и трансформирован в клетки штамма Escherichia coli BL21(DE3) для экспрессии белка. Рекомбинантный белок HlFBA (rHlFBA) очищали с помощью аффинной хроматографии, и результаты вестерн-блоттинга свидетельствовали о том, что белок rHlFBA был иммуногенным.

Результаты иммуноферментного анализа показали, что у кроликов, иммунизированных рГЛФБА, возник гуморальный иммунный ответ, специфичный к рГЛФБА. Исследование заражения клещами показало, что по сравнению с клещами в группе, меченной гистидином тиоредоксином (Trx), масса набухшего клеща, откладка яиц у самок клещей и скорость вылупления яиц у клещей в группе rHlFBA были снижены на 22,6%, 45,6% и 24,1% соответственно. На основании совокупного эффекта этих трех параметров общая иммунная эффективность рГФБА составила 68,4%.

FBA — это кандидатная противоклещевая вакцина, которая может значительно снизить массу набухшего клеща, откладку яиц и скорость вылупления яиц. Использование ферментов, участвующих в метаболизме глюкозы, является новой стратегией разработки противоклещевых вакцин.

Клещи, являющиеся обязательными кровососущими членистоногими, являются основными переносчиками патогенов у людей и животных во всем мире [1]. И клещи, и микробы, которые они передают, представляют собой серьезную угрозу для здоровья человека и животных [2]. Haemaphysalis longicornis (Acari: Ixodidae) — вид клещей, обитающий в Восточной Азии и прижившийся в Австралии, Новой Зеландии и на некоторых островах Тихого океана [3]. Он передает такие патогены, как Theileria uilenbergi, Babesia motasi, Rickettsia hebeiii и Anaplasma phagocytophilum [4,5,6,7]. Он также является переносчиком вируса тяжелой лихорадки с синдромом тромбоцитопении (SFTSV), который представляет угрозу для здоровья человека и животных [8]. Поэтому крайне важно разработать анти-H. longicornis [9, 10].

Галай и др. оценили два типа железосвязывающего белка ферритина из H. longicornis (HlFER), внутриклеточный HlFER1 и секреторный HlFER2, в качестве противоклещевых вакцин [11]. Результаты вестерн-блоттинга показали, что антитела перекрестно реагировали с рекомбинантным HlFER (rHlFER), а также реагировали с нативными HlFER. Эксперимент по заражению клещами показал, что клещи, которых кормили кроликом, инокулированным rHlFER2, имели меньшую массу набухания, чем клещи в контрольной группе. Откладка яиц и выводимость были снижены в обеих группах, инокулированных RFER. Эффективность вакцины rHlFER1 и rHlFER2 составила 34% и 49% соответственно [11]. В другом исследовании была идентифицирована открытая рамка считывания (ORF) суболезина H. longicornis (HlSu) и рекомбинантный HlSu (rHlSu), экспрессируемый в Escherichia coli [12]. Кролики, иммунизированные rHlSu, вызывали иммунный ответ. В группе, иммунизированной rHlSu, масса набухания и откладка яиц у самок клещей были значительно ниже, чем в контрольной группе. Расчетная эффективность вакцины составила 37,4% [12]. В последующем исследовании Wang et al. клонировали ген гомолога липокалина H. longicornis (HlLIP) в pET-32(a+) для получения рекомбинантного белка (rHlLIP); Иммуногенность RH1LIP была подтверждена вестерн-блоттингом [13]. Испытание иммунизации на кроликах, зараженных H. longicornis, показало, что антитела против белка rHllIP снижают массу нагула, яйцекладку и выводимость (эффективность вакцины с белком rHlLIP составила 60,17%). Однако на сегодняшний день коммерческий анти-H. Вакцина longicornis в настоящее время недоступна, поэтому важно провести скрининг на наличие эффективного защитного антигена против заражения H. longicornis.